本发明涉及一种转基因玉米HiII‑NGc‑1外源插入片段的右边界侧翼序列、其应用、引物对、试剂盒及其使用方法。所述右边界侧翼序列能够特异性地指示转基因玉米HiII‑NGc‑1，所述引物对、试剂盒及其使用方法基于所述右边界侧翼序列能够快速、准确地检测待测样品是否为转基因玉米HiII‑NGc‑1，对提高转基因玉米HiII‑NGc‑1的鉴定效率、转基因产品的管理与检测以及种质资源的鉴定具有重要的意义。